反相色譜法以被測的高分子為固定相、以惰性氣體為流動相，為了測定需要，在流動相中加入一些探針分子，它們是揮發性的低分子。將探針分子注入氣化室氣化后，由載氣帶入色譜柱，測定它們在兩相中的分配，從而研究高分產的各種性質，高分子與探針分子的相互作用以及高分子與高分子間的相互作用。

 

反相色譜是迄今在液相色譜中應用廣泛的技術，主要是因為它適用于分析極大多數的非極性物質和很多的可離子化的及離子化合物。大多數用于反相色譜的固定相本質上都是疏水物質，因此，分析物是按照它們與固定相的疏水相互作用的大小程度來分離的，樣品基體中其它疏水雜質組分也能以同樣的方式保留。

 

在反相色譜法中的固定相是被共價結合到硅膠載體上的直往飽和烷烴，其鏈的長短不同，長的是十八烷基、這也是使用得多的固定相、流動相的極性比固定相的極性強。在反相鍵合相色譜中，極性大的組分先流出、性小的組分后流出。一般說來，固定相上的烷基配合基或被分離分子中非極性部分的表面積越大，或者流動相表面張力及介電常數越大，則締合作用越強，保留值越大。

 

反相色譜的影響因素：

 

1、溶質的分子結構（極性）

極性越弱，疏水性越強，k越大，tR也越大。同系物碳數越多，極性越弱，k越大；引入極性取代基，降低疏水性，k值變小。

2、固定相

鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長而增加，溶質的k也增大。硅膠表面鍵合烷基的濃度越大，則溶質的k越大。

3、流動相

極性越強，洗脫能力越弱，使溶質的k越大；溶劑種類：水為弱溶劑，醇為強溶劑；溶劑比例：水的比例增加，使k增大。